#gtme

[glowwormcave]

!!!!!!!!:) :) !!!

[spideriot]

i was supposed to watch npmd with one of my irls but that somehow spun into dragging 3 more of my irls into watching tgwdlm and therefore getting gtme hooked on it?? i mean?? we win these ig???

[originofignorance]

mhungry bt they didn gtme food :(

[cchrisevans]

get to know me meme | [5/5] favorite actresses » Lucy Hale

[benbuhayattabrokoliyim]

Şurada paylaştığım her sevincim gtme kaçıyor aq 5 dk falan hiçbir şeyimi yazmıcam buraya

[yasayanbirbal]

Rüyanda gormussun beni üzdün mu beni orda Unutamıyorum biliyormusun sen arkadaslarinla eglen diye arladaslarimim yanima gitmeyisimi rahatsız olup kntinden gtme diye o soğuk havada disarda gezdiğimi bana nasilsin diye sormayasigini istemiyorum diye bagirislarini ve hiç dinmeyen gözyaşlarımı senin ismim bana bunlari hatırlatıyor ve ben hala pisman değilim biliyor musun ben hala seni sevdim diye pisman değilim ama sen birgun tan��madığın bir yürekte kim vurduya gidiceksin bana yaptığın gibi :)

[mustafaokutan]

Bugün kokusunu aldıkları taze yaprak ve çiçekleri doğru gtme içgüdülerine karışan olmamıştı. Çocuk gibi sevinçliydiler. Keçiler yüreğinin götürdüğü yere gidiyordu . Neşeyle hoplayıp zıplıyorlardı. Çoban da pek mutluydu bugün. Yanık sesiyle bir türkü tutturmuştu. Kazdağları'nın akustik ortamında sessizliği yara yara gökyüzünü yükseliyordu nağmeler. Kuşlar, Arılar, Kelebekler, Ağustos böcekleri bir saz heyeti gibi eşlik ediyordu çobana. Keçiler melemeleri ile lokal yapıyordu. Mutluluk ta bulaşıcı olmalıydı. Zira sürünün güvenliğinden sorumlu köpeklerde bu havaya dayanamayıp birbiriyle oynamaya başladılar. Bu şekilde epey bir yol aldılar. Aşağıdan su sesi duyulmaya başladığında çoban ŞahinDeresi Kamyonu'na yaklaştıklarını anladı. Sürü için tehlikeli sayılabilecek dik uçurumlara keçilerin yaklaşmaması için köpekler o tarafa gönderdi. Gerçekten köpekleri işlerini başarıyla yaparak sürünün yönünü değiştirdiler. Çobanda oraya kadar yürüme zahmetinden kurtulduğu için durumdan memnundu #alıntı @veliidalbudak . . . 💝A��kla okuyoruz. 🥰 📸🖋👏Bu fotoğrafın ve yorumun sahibi @kitapokufotografcek teşekkürler. 💘Aşkla okumak için takip etmelisiniz. 💖Konu etiketimizi #kitapokufotografcek takip edin ve kullanın 📖📝Gönderi ve hikayenizde bizi paylaş bizde kitaplarınızı paylaşalım. ✅@facebook gebzevecevresifotograflari @tumblr, @twitter,@1000kitap, @google ile tüm sosyal medyada heryerdeyiz #fotografcekkitapoku #kitap#kitapkurdu#yazar#edebiyat#kitaplar#kitapkokusu#okumahalleri#kitapaşkı#kitaptavsiyesi#kitapsevgisi#kitaplik#kitaplariyivar#kitapsever#kitapyurdu#okuyorum#kitapoku#instakitap#okudumbitti#kitapokuyorum#kitapyorumu #kitapaskı #kitapönerisi (Darıca Province) https://www.instagram.com/p/CEWqV8hJQGU/?igshid=1a4wgebgcyll8

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[livxmartinson]

MRGE GTME

When someone picks up your phone and you left the SMUT open

[cchrisevans]

get to know me meme | [3/5] favorite actresses » Holland Roden

[ikitabakmanti]

Zaten yarından sonra 2 hafta falan girmem sonrasında da pek sanmıyorum lsşkdjfkvöşsldfks MUTLU SON

gtme snsz yşymm

[anarcho-abbyism]

La base genética para la tolerancia al etanol

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Las fermentaciones industriales a menudo usan materias primas de sustrato y nutrientes que son complejos y no están bien caracterizados. La viabilidad económica del proceso depende de la capacidad del huésped para tolerar no solo la inhibición del producto y del sustrato, sino también la presencia de otros inhibidores que son subproductos o impurezas en los componentes del medio. La ingeniería metabólica racional de estos fenotipos de tolerancia en cepas además de cumplir con los criterios deseados de tasa, título y rendimiento es una tarea desalentadora ya que generar la correlación fenotipo-genotipo para cada fenotipo deseado y su interacción entre ellos es laborioso y requiere muchos datos.. Algunos de los fenotipos de inhibición del producto son monogénicos, como la inhibición de retroalimentación clásica en un objetivo enzimático. Estos tipos de fenotipos se diseñan con éxito mediante el aislamiento de mutantes resistentes a un análogo del producto o la sobreexpresión de ciertos genes o loci del genoma (95). La disponibilidad de pantallas y microarrays de alto rendimiento para analizar mutantes generados en experimentos de evolución dirigida o en bibliotecas de mutagénesis clásicas ha resultado en el aislamiento de cepas con mejoras marginales del fenotipo deseado, especialmente fenotipos monogénicos. Sin embargo, muchos de los otros fenotipos de tolerancia, como la tolerancia al etanol o al butanol, la tolerancia a inhibidores como el acetato en la biomasa celulósica sacarificada, o el pH bajo y la temperatura alta son poligénicos que involucran genes distribuidos en el genoma. La ingeniería de tales fenotipos distribuidos poligénicos ha sido demostrada por las nuevas estrategias de ingeniería de todo el genoma completo.

Ingeniería evolutiva y tecnologías de detección. Los avances en las tecnologías de detección y la automatización en el manejo de pequeñas cantidades de líquidos en condiciones asépticas han aumentado el rendimiento de las herramientas clásicas de evolución dirigida, como los enriquecimientos de dilución en serie y las selecciones de quimiostato. Utilizando una combinación de knock-outs específicos seguidos de una evolución dirigida bajo condiciones de crecimiento selectivo, se han aislado cepas de E. coli que producen 1,2 M d-lactato a partir de glucosa al 12% (p / v) (96, 97). Se usó una estrategia similar para convertir S. cerevisiae para utilizar xilosa ensamblando primero la ruta de la xilosa seguida de una evolución prolongada en condiciones selectivas (98). Los avances en la aplicación de FACS en formato de alto rendimiento han permitido una búsqueda mucho más eficiente de la diversidad genética creada en bibliotecas de mutagénesis al azar o combinatorias, permitiendo el aislamiento de cepas con fenotipos para los que no hay una buena selección. Estas estrategias se desarrollaron y aplicaron con éxito en las bibliotecas de cribado de Synechosystis sp. PCC6803 y E. coli sobreproducen poli-3-hidroxibutirato (99). Aplicación de citometría de flujo multiparamétrica para estudiar la formación de cuerpos de inclusión (IB) en E. de alta densidadLa fermentación de coli permite una rápida optimización de la formación de IB (100, 101). Este método puede adaptarse para cribar bibliotecas de hospedantes mutantes generadas por mutagénesis aleatoria clásica o evolución dirigida para aumentar la formación de IB en formato de alto rendimiento. Otra aplicación de FACS demostró el cribado de una biblioteca genómica de Acinetobacter calcoacetius en E. coli para la expresión de un antígeno de superficie (102).

gTME. gTME usa un factor transcripcional mutante que perturba todo el transcriptoma de manera sutil que permite la expresión de fenotipos poligénicos (103). Los fenotipos poligénicos suelen depender de loci que se distribuyen en todo el genoma. Este enfoque se utiliza en la sobreproducción de licopeno en E. coli y la ingeniería de tolerancia al etanol en levaduras (103, 104). Del mismo modo, la ingeniería de genes reguladores globales podría conducir a un equilibrio sutil de las redes de vías para maximizar el título o el rendimiento del producto sin una intervención genética significativa a nivel de enzima o vía local. Por ejemplo, la eliminación del regulador global de almacenamiento de carbono aumenta el flujo hacia la biosíntesis de fenilalanina en E. coli al afectar a 25 enzimas y / o genes diferentes del metabolismo del carbono (105). Una extensión de este enfoque sería utilizar una biblioteca de reguladores globales mutantes en el huésped deseado y seleccionar / seleccionar los fenotipos deseados.

La base genética para la tolerancia al etanol, un fenotipo de importancia crítica para la tecnología del etanol celulósico, es compleja y potencialmente involucra 40-60 genes. gTME ha aislado con éxito cepas de E. coli y levadura tolerantes al etanol seleccionando una biblioteca de población que alberga factores de transcripción mutantes en presencia de niveles crecientes de etanol. MI. Se han aislado cepas de coli tolerantes a 60 g / L de etanol, y se han informado cepas de levadura con una mejora del 70% en la productividad volumétrica (103, 104, 106). Aunque no es imposible, acceder a estos tipos de fenotipos complejos mediante mutagénesis y selección al azar llevaría mucho tiempo. gTME también se ha aplicado con éxito para apilar múltiples fenotipos en un solo huésped, como la tolerancia al etanol y SDS en E. coli (103).

WGS (baraja de genoma completo). La mezcla aleatoria del genoma es una herramienta relativamente nueva, que ha permitido mejorar los títulos de los productos sintetizados mediante vías complejas en Streptomyces, Lactobacillus, Sphingobium y E. coli. En todos estos casos, la diversidad genética se generó utilizando técnicas clásicas de mutagénesis como NTG, UV y / o enriquecimientos de quimiostato, seguido de fusión recursiva de protoplastos de poblaciones mutantes y selección / selección de los fenotipos deseados. La fusión recurrente de protoplastos permite la recombinación multiparental en cada generación en contraste con los enfoques de reproducción clásicos que permiten el apareamiento de dos padres, presentando así una biblioteca combinatoria para selección o selección en cada generación (7). Una vez que se acumula una mutación beneficiosa en el fondo del huésped, la recombinación debida a la fusión de protoplastos entre múltiples padres evalúa el efecto sinérgico de esa mutación en el fondo de todos los otros rasgos beneficiosos ya presentes en la población sin tener que generar todas las combinaciones posibles experimentalmente. Del mismo modo, las mutaciones no beneficiosas se eliminan, lo que aumenta la aptitud del huésped, de la misma manera que el retrocruzamiento en un programa de reproducción clásico.

La tolerancia al pH bajo y al estrés ácido, como la tolerancia a los solventes, son fenotipos complejos que involucran al menos 18 loci diferentes en el caso de Lactococcus lactis. En E. coli, la respuesta ácida da como resultado la inducción de varios loci, lo que sugiere que un enfoque dirigido de ingeniería metabólica será laborioso. La combinación aleatoria del genoma mediante fusión de protoplastos recursiva se usó para aislar cepas de Lactobacillus con mayor tolerancia al pH bajo (3.8), que no se ha informado hasta la fecha utilizando mutagénesis / selección al azar o enfoques de ingeniería metabólica específicos (7, 107). En estos estudios, los mutantes aislados tolerantes al pH no se analizaron para descubrir la composición genotípica subyacente presumiblemente debido a la naturaleza laboriosa de las herramientas disponibles. La falta de análisis de fenotipo-genotipo de estos mutantes con baja tolerancia al pH descarta el potencial para la optimización local dirigida utilizando las herramientas de ingeniería metabólica. Sin embargo, los enfoques recientes de todo el genoma para caracterizar las poblaciones mutantes en paralelo utilizando microarrays de genoma completo y / o superponiendo un enfoque basado en gTME podrían complementar las estrategias de mezcla genómica anteriores para mejorar semi racionalmente los rasgos deseables en una escala de tiempo más rápida.

La productividad volumétrica del ácido láctico se incrementó 3,1 veces en Lactobacillus rhamnosus en solo tres rondas de combinación genómica mediante fusión recursiva de protoplastos (107). Mejora de títulos de antibióticos tilosina en Streptomyces fradiae y ácido hidroxicítrico ácido orgánico en Streptomyces sp. U121 a través de la combinación genómica se ha demostrado recientemente (6, 108). La degradación del pentaclorofenol (PCP) también se ha mejorado con éxito en Sphingobium chlorophenolicum ATCC 39723 utilizando enfoques de combinación genómica (109).

Las aplicaciones resaltadas anteriormente de la combinación aleatoria del genoma a través de la fusión recursiva de protoplastos reitera el poder de esta tecnología en la ingeniería de fenotipos complejos en huéspedes mal caracterizados, que no están maduros para enfoques de biología metabólica y / o sintética. Aunque el formato anterior de la ingeniería del genoma a través de la combinación genómica es ventajoso para la optimización global de los fenotipos, tiene varios inconvenientes. La combinación aleatoria de genomas mediante protoplastización recursiva genera enormes bibliotecas combinatorias que son difíciles de evaluar en pantallas en ausencia de selecciones. En el caso de la producción de ácido hidroxicítrico, las estrategias de cribado selectivo mediante la inclusión de ácido trans -epoxiaconítico análogo (EAA) en el medio de regeneración permitieron la eliminación de protoplastos no fusionados de la biblioteca, permitiendo así el cribado que es más efectivo. La fusión de protoplastos de dos cepas de levadura parental para generar nuevos rasgos para la levadura de vino es una tecnología antigua, cuya principal limitación es la estabilidad de la nueva progenie ya que el genotipo de las cepas parentales divergen (110-113). Aún no se ha demostrado la combinación genómica de la levadura mediante la fusión recursiva de protoplastos de múltiples padres.

Otro formato de mejoramiento genómico en el que las mutaciones beneficiosas se reconstituyen en un solo huésped para expresar fenotipos complejos duales es el desarrollo de un proceso de fermentación a 40 ° C para la sobreproducción de lisina (31, 114). Dado que las fermentaciones que operan a temperaturas más bajas requieren una mayor capacidad de enfriamiento, especialmente durante los meses de verano, existe un incentivo para desarrollar huéspedes termotolerantes para la producción de productos químicos como la lisina. Sin embargo, los huéspedes termotolerantes fácilmente disponibles como Bacillus licheniformis, Bacillus methanolicus y Corynebacterium thermoaminogenes tienen una eficiencia limitada para mejorar la producción de lisina. Los productores comerciales de l-lisina como C. glutamicum, que generalmente se aíslan mediante múltiples rondas de mutagénesis y selección, producen lisina en títulos muy altos (100 g / L) (114). Sin embargo, a menudo estas cepas se ven comprometidas en otros rasgos como la tasa de crecimiento, la robustez o las tasas de consumo de azúcar como resultado de la acumulación de indeseables. mutaciones Este escenario suele ser el caso en muchos huéspedes industriales donde la mutagénesis aleatoria y la selección a lo largo de los años mejoran el fenotipo seleccionado pero a costa de otros rasgos relevantes en comparación con el tipo salvaje. La genómica comparativa basada en la secuencia y la información bioquímica entre el hiperproductor mutante de lisina y el tipo salvaje permitió identificar las mutaciones beneficiosas que fueron manipuladas en el tipo salvaje por intercambio de alelos. La acumulación secuencial de las mutaciones relevantes en el fondo de tipo salvaje dio como resultado una cepa que podría producir lisina en títulos altos a 40 ° C, un rango de temperatura que no era propicio para el mutante original. Un enfoque alternativo para recuperar los fenotipos perdidos como resultado de mutaciones deletéreas es retrocruzar al mutante con la cepa de tipo salvaje mediante fusión de protoplastos recursiva o aislar todos los loci del genoma de tipo salvaje que rescata el fenotipo (s) perdido. Un enfoque práctico para aislar todos los determinantes genéticos. Contribuir a la aptitud deseada en un solo experimento es implementar un experimento de enriquecimiento basado en microarrays de ADN genómico completo que caracteriza las bibliotecas genómicas en paralelo, como en ESCALA.

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Fixed - Vibration not working on LG Q70

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