#traitement des coupes semi-fines et ultra-fines

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Traitement des coupes semi-fines et ultra-fines

Gérer un prélèvement dans le but de l'observer au microscope électronique (ME) est différent que pour un microscope optique (MO), car ce ne sont pas les mêmes principes pour l'observation, ni la même épaisseur de coupe qui doit être plus fine pour le ME. Selon les lames de rasoir sur l'ultra-microtome, l'épaisseur des coupes change : on obtient des coupes dites semi-fines avec une lame de verre, et des coupes ultra-fines avec une lame de diamant.

La coupe semi-fine, d'un micromètre (µm) d'épaisseur, est colorée au bleu de toluidine, puis le prélèvement est monté sur une lame de verre pour être observé au MO. Son interprétation va servir à sélectionner une plus petite zone à observer ensuite au ME sur la coupe ultra-fine.

La coupe ultra-fine, entre un demi-nanomètre et un demi-micromètre d'épaisseur, est manipulée sur une grille de récupération pour ne pas l'abimer ou bêtement la perdre, et ne va pas être coloré. En effet les colorants absorbent les photons du MO pour faire du contraste ; or le ME n'utilise pas des photons mais des électrons et donc les agents de contrastes doivent pouvoir absorber des électrons cette fois. C'est pourquoi on utilise des métaux lourds comme des sels de plomb ou de l'uranium. La coupe est ensuite montée, toujours avec sa grille, via deux supports : un d'observation pour la machine, et un d'archivage pour stocker le prélèvement.

Source photos : grille de métal pour ME Dutscher : http://www.dutscher.com/images/zoom/0D-12-37.jpg / microscope électronique par le Pr. P. Dubus, Méthodes d'études en histologie pour U-Bordeaux 2014-2015

Ces schémas ont été faits pour mes ED du Tutorat à partir des cours que j'ai retranscrit quand j'étais en première année de médecine. Ma seule source est le professeur de l'époque, et je peux avoir mal compris certaines choses, faire des approximations fausses, etc même si je fais de mon mieux. Croiser les sources permet d'avoir des informations plus fiables. N'hésitez pas à commenter pour discuter des sujets abordés ! Schémas et explications faits entre 2015 et 2016.

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Traitement d'un prélèvement pour une observation au ME

Gérer un prélèvement dans le but de l'observer au microscope électronique (ME) est différent que pour un microscope optique (MO), car ce ne sont pas les mêmes principes pour l'observation, ni la même épaisseur de coupe qui doit être plus fine pour le ME.

Sur la macroscopie à l'état frais, on sélectionne une partie du prélèvement à observer qu'on va mettre dans une cassette, différente que pour les tissus fixés car plus petite et cubique (1mm d'arrête ; d'ailleurs c'est pas la bonne photo mais on fait avec ce qu'on a). La fixation se fait ensuite par immersion avec des fixateurs propre à ce protocole : il y a d'abord plusieurs bains pendant 1h dans du glutaraldéhyde, puis plusieurs bains pendant 24h dans de l'acide osmique. L'inclusion se fait ensuite avec de la résine époxy, une substance plus rigide que la paraffine ce qui permet ensuite de faire des coupes plus fines.

Les coupes sont ici appelées micro-coupes, et faites avec un ultra-microtome (à opposer au simple microtome utilisé pour les tissus inclus en paraffine). On peut changer les lames de ce dernier : plus la lame est dure et plus la coupe est fine : ainsi on obtient des coupes dites semi-fines avec une lame de verre, et des coupes ultra-fines avec une lame de diamant.

Source photo : cassette macroset Dutscher : http://www.dutscher.com/images/zoom/0D-12-21.jpg / ultra-microtome par le Pr. P. Dubus, Méthodes d'études en histologie pour U-Bordeaux 2014-2015

Ces schémas ont été faits pour mes ED du Tutorat à partir des cours que j'ai retranscrit quand j'étais en première année de médecine. Ma seule source est le professeur de l'époque, et je peux avoir mal compris certaines choses, faire des approximations fausses, etc même si je fais de mon mieux. Croiser les sources permet d'avoir des informations plus fiables. N'hésitez pas à commenter pour discuter des sujets abordés ! Schémas et explications faits entre 2015 et 2016.